Standardprotokolle für qPCR Assays

Zur Berechnung der notwendigen Reagenzien und Verdünnungen nutzen Sie doch unseren qPCR Calculator.

Unsere qPCR Calculator – Berechnen Sie ganz einfach Ihren qPCR Ansatz

qPCR Mastermix – 96-Well

Komponente25 μl PCR-ReaktionFinale Konzentration
2x PCR Mastermix12,5 µl1 x
Forward primer (i.e. 5 pmol/µl)variabel (z.B. 2 µl)0.1 – 0.2 µM    
Reverse primer (i.e. 5 pmol/µl)variabel (z.B. 2 µl)0.1 – 0.2 µM    
Template DNAvariabel0.1 – 10 ng/Reaktion
ddH2Oauf 25 μl finales Volumen auffüllen

qPCR Mastermix – 384-Well

Komponente10 μl PCR-ReaktionFinale Konzentration
2x PCR Mastermix5 µl1 x
Forward primer (z.B. 5 pmol/µl)variabel (z.B. 1 µl)0.1 – 0.2 µM    
Reverse primer (z.B. 5 pmol/µl)variabel (z.B. 1 µl)0.1 – 0.2 µM    
Template DNAvariabel0.1 – 10 ng/Reaktion
ddH2Oauf 10 μl finales Volumen auffüllen

qPCR – 2 Step Einstellungen

SchrittZeitTemperatur
Denaturierung3-5 Minuten95°C
35 – 40 Zyklen
Denaturierung10 Sekunden95°C
Annealing + ExtensionVariabel, hängt von Amplikonlänge ab, meist 60 Sekunden60° – 72°C (je nach Primer)

qPCR – 3 Step Einstellungen

SchrittZeitTemperatur
Denaturierung3-5 Minuten95°C
35 – 40 Zyklen
Denaturierung10 Sekunden95°C
Annealing10 Sekunden60° – 72°C (je nach Primer)
ExtensionVariabel, hängt von Amplikonlänge ab, meist 30 Sekunden72°C

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Jan Winter

Product Manager Genomics

PCR, qPCR, Magnetic Beads & CRISPR/Cas9

+49 (152) 3361 2537

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