Standardprotokolle für qPCR Assays

Zur Berechnung der notwendigen Reagenzien und Verdünnungen nutzen Sie doch unseren qPCR Calculator.

Unsere qPCR Calculator – Berechnen Sie ganz einfach Ihren qPCR Ansatz

qPCR Mastermix – 96-Well

Komponente 25 μl PCR-Reaktion Finale Konzentration
2x PCR Mastermix 12,5 µl 1 x
Forward primer (i.e. 5 pmol/µl) variabel (z.B. 2 µl) 0.1 – 0.2 µM    
Reverse primer (i.e. 5 pmol/µl) variabel (z.B. 2 µl) 0.1 – 0.2 µM    
Template DNA variabel 0.1 – 10 ng/Reaktion
ddH2O auf 25 μl finales Volumen auffüllen

qPCR Mastermix – 384-Well

Komponente 10 μl PCR-Reaktion Finale Konzentration
2x PCR Mastermix 5 µl 1 x
Forward primer (z.B. 5 pmol/µl) variabel (z.B. 1 µl) 0.1 – 0.2 µM    
Reverse primer (z.B. 5 pmol/µl) variabel (z.B. 1 µl) 0.1 – 0.2 µM    
Template DNA variabel 0.1 – 10 ng/Reaktion
ddH2O auf 10 μl finales Volumen auffüllen

qPCR – 2 Step Einstellungen

Schritt Zeit Temperatur
Denaturierung 3-5 Minuten 95°C
35 – 40 Zyklen
Denaturierung 10 Sekunden 95°C
Annealing + Extension Variabel, hängt von Amplikonlänge ab, meist 60 Sekunden 60° – 72°C (je nach Primer)

qPCR – 3 Step Einstellungen

Schritt Zeit Temperatur
Denaturierung 3-5 Minuten 95°C
35 – 40 Zyklen
Denaturierung 10 Sekunden 95°C
Annealing 10 Sekunden 60° – 72°C (je nach Primer)
Extension Variabel, hängt von Amplikonlänge ab, meist 30 Sekunden 72°C

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Jan Winter

Product Manager Genomics

PCR, qPCR, Magnetic Beads & CRISPR/Cas9

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