Standardprotokolle für qPCR Assays
Zur Berechnung der notwendigen Reagenzien und Verdünnungen nutzen Sie doch unseren qPCR Calculator.
qPCR Mastermix – 96-Well
| Komponente | 25 μl PCR-Reaktion | Finale Konzentration |
| 2x PCR Mastermix | 12,5 µl | 1 x |
| Forward primer (i.e. 5 pmol/µl) | variabel (z.B. 2 µl) | 0.1 – 0.2 µM |
| Reverse primer (i.e. 5 pmol/µl) | variabel (z.B. 2 µl) | 0.1 – 0.2 µM |
| Template DNA | variabel | 0.1 – 10 ng/Reaktion |
| ddH2O | auf 25 μl finales Volumen auffüllen |
qPCR Mastermix – 384-Well
| Komponente | 10 μl PCR-Reaktion | Finale Konzentration |
| 2x PCR Mastermix | 5 µl | 1 x |
| Forward primer (z.B. 5 pmol/µl) | variabel (z.B. 1 µl) | 0.1 – 0.2 µM |
| Reverse primer (z.B. 5 pmol/µl) | variabel (z.B. 1 µl) | 0.1 – 0.2 µM |
| Template DNA | variabel | 0.1 – 10 ng/Reaktion |
| ddH2O | auf 10 μl finales Volumen auffüllen |
qPCR – 2 Step Einstellungen
| Schritt | Zeit | Temperatur |
| Denaturierung | 3-5 Minuten | 95°C |
| 35 – 40 Zyklen | ||
| Denaturierung | 10 Sekunden | 95°C |
| Annealing + Extension | Variabel, hängt von Amplikonlänge ab, meist 60 Sekunden | 60° – 72°C (je nach Primer) |
qPCR – 3 Step Einstellungen
| Schritt | Zeit | Temperatur |
| Denaturierung | 3-5 Minuten | 95°C |
| 35 – 40 Zyklen | ||
| Denaturierung | 10 Sekunden | 95°C |
| Annealing | 10 Sekunden | 60° – 72°C (je nach Primer) |
| Extension | Variabel, hängt von Amplikonlänge ab, meist 30 Sekunden | 72°C |
Your Product Specialist
Jan Winter
Product Manager Genomics
PCR, qPCR, Magnetic Beads & CRISPR/Cas9
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